ⅠNácido ucléicoiintroducción
El ácido nucleico se divide en ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN), entre los cuales el ARN se divide en ARN ribosomal (ARNr), ARN mensajero (ARNm) y ARN de transferencia (ARNt) según sus diferentes funciones.El ADN se concentra principalmente en el núcleo, las mitocondrias y el cloroformo, mientras que el ARN se distribuye principalmente en el citoplasma.Como base material de la expresión genética, la extracción de ácidos nucleicos desempeña un papel extremadamente importante en la investigación en biología molecular y en el diagnóstico molecular clínico.La concentración y pureza de la extracción de ácido nucleico afectará directamente la PCR posterior, la secuenciación, la construcción de vectores, la digestión enzimática y otros experimentos.
Ⅱ Método de extracción y purificación de ácidos nucleicos.
① Método de extracción con fenol/cloroformo
La extracción con fenol/cloroformo es un método clásico para la extracción de ADN, que utiliza principalmente dos disolventes orgánicos diferentes para tratar las muestras, disolviendo el ácido nucleico basado en ADN en la fase acuosa, los lípidos en la fase orgánica y las proteínas entre las dos fases.Este método tiene las ventajas de bajo costo, alta pureza y buen efecto.Las desventajas son un funcionamiento complicado y mucho tiempo.
② Método Trizol
El método Trizol es un método clásico para la extracción de ARN.El método Trizol se divide en fase acuosa y fase orgánica después de centrifugación con cloroformo, en el que el ARN se disuelve en la fase acuosa, la fase acuosa se transfiere a un nuevo tubo EP, se obtiene la precipitación después de agregar isopropanol y luego purificación con etanol.Este método es adecuado para la extracción de ARN de tejidos, células y bacterias de animales.
③ Método de purificación de columna centrífuga
El método de purificación en columna centrífuga puede adsorber el ADN específicamente a través de materiales especiales de adsorción de matriz de silicio, mientras que el ARN y las proteínas pueden pasar sin problemas, y luego usar un PH alto y con alto contenido de sal para combinar ácido nucleico, elución con un valor de PH alto y bajo en sal para separar y purificar el ácido nucleico.Las ventajas son una alta concentración de purificación, una alta estabilidad, la ausencia de necesidad de disolventes orgánicos y un bajo coste.La desventaja es que es necesario centrifugar paso a paso, más pasos de operación.
④ Método de cuentas magnéticas
El método de las perlas magnéticas consiste en dividir la muestra de tejido celular a través del lisado, liberar el ácido nucleico en la muestra y luego las moléculas de ácido nucleico se adsorben específicamente en la superficie de la perla magnética, mientras que las impurezas como proteínas y azúcares quedan en el líquido.A través de los pasos de división del tejido celular, unión de perlas magnéticas con ácido nucleico, lavado de ácido nucleico, elución de ácido nucleico, etc., finalmente se obtiene ácido nucleico puro.Las ventajas son un funcionamiento sencillo y un uso breve, sin necesidad de centrifugación escalonada.Tiene bajos requisitos técnicos y puede realizar operaciones automáticas y en masa.La combinación específica de perlas magnéticas y ácido nucleico produce un ácido nucleico extraído con alta concentración y pureza.La desventaja es que el precio actual de mercado es relativamente caro.
⑤ Otros métodos
Además de los cuatro métodos anteriores, existen el craqueo por ebullición, el método de sal concentrada, el método de detergente aniónico, el método ultrasónico y el método enzimático, etc.
Ⅲ Tipo de extracción de ácido nucleico
Foregene tiene la plataforma de PCR directa líder en el mundo, plataforma de aislamiento de ARN de doble columna (solo ADN + solo ARN).Los productos principales incluyen kits de aislamiento de ADN/ARN, series de reactivos de laboratorio molecular para PCR y reactivos de PCR directa.
① Extracción de ARN total
Las muestras de extracción de ARN total incluyen sangre, células, tejidos animales, plantas, virus, etc. Se puede obtener una alta pureza y una alta concentración de ARN total mediante la extracción de ARN total, que se puede utilizar en RT-PCR, análisis de chips, traducción in vitro, clonación molecular, Dot Blot y otros experimentos.
Relacionado con ForegeneKits de aislamiento de ARN
Kit de aislamiento de ARN total animal--Extraiga rápida y eficientemente ARN total de alta pureza y calidad de diversos tejidos animales.
Kit de aislamiento de ARN total celular--Se puede obtener ARN total altamente purificado y de alta calidad a partir de varias células cultivadas en 11 minutos.
Kit de aislamiento de ARN total de plantas--Extraiga rápidamente ARN total de alta calidad de muestras de plantas con bajo contenido de polisacáridos y polifenoles.
Kit de aislamiento de ARN viral--Aislar y purificar rápidamente el ARN viral de muestras como plasma, suero, fluidos corporales libres de células y sobrenadantes de cultivos celulares.
② Extracción de ADN genómico
Las muestras de extracción de ADN genómico incluyen tierra, heces, sangre, células, tejidos animales, plantas, virus, etc. La extracción de ADN genómico se puede utilizar en digestión enzimática, construcción de bibliotecas de ADN, PCR, preparación de anticuerpos, análisis de hibridación por transferencia Western, chip genético, alta -secuenciación de rendimiento y otros experimentos.
Relacionado con ForegeneKits de aislamiento de ADN
Kit de aislamiento de ADN de tejido animal--Extracción y purificación rápida de ADN genómico de múltiples fuentes, como tejidos animales, células, etc.
Kit Midi de ADN en sangre (1-5 ml)--Purifica rápidamente el ADN genómico de alta calidad a partir de sangre anticoagulada (1-5 ml).
Kit de aislamiento de ADN con hisopo bucal/tarjeta FTA--Purifique rápidamente ADN genómico de alta calidad a partir de muestras de hisopo bucal/tarjeta FTA.
Kit de aislamiento de ADN vegetal--Purifique y obtenga rápidamente ADN genómico de alta calidad a partir de muestras de plantas (incluidos polisacáridos y muestras de plantas de polifenoles)
③ Extracción de plásmido
El plásmido es un tipo de ADN de molécula pequeña circular en las células, que es un portador común para la recombinación del ADN.El método de extracción de plásmidos consiste en eliminar el ARN, separar el plásmido del ADN genómico bacteriano y eliminar proteínas y otras impurezas para obtener un plásmido relativamente puro.
Mini kit de plásmido general--Purifica rápidamente ADN plasmídico de alta calidad a partir de bacterias transformadas para experimentos rutinarios de biología molecular, como transformación y digestión enzimática.
④ Otros tipos de extracción, extracción de miARN, etc.
Kit de aislamiento de miARN animal--Extraiga rápida y eficientemente pequeños fragmentos de ARN de 20-200 nt miARN, siARN y snARN de diversos tejidos y células animales.
Ⅳ Requisitos para el resultado de extracción y purificación de ácidos nucleicos.s
① Para garantizar la integridad de la estructura primaria del ácido nucleico.
② Reducir la interferencia de proteínas, azúcares, lípidos y otras macromoléculas.
③ No debe haber disolventes orgánicos ni altas concentraciones de iones metálicos que puedan inhibir la enzima en las muestras de ácido nucleico.
④ Al extraer el ADN se debe eliminar la contaminación por ARN y otros ácidos nucleicos, y viceversa.
Hora de publicación: 24-nov-2022
